Le potentiel thérapeutique de l'ARNm est largement discuté en période de recherche de vaccins dans la recherche sur COVID-19. L'idée est de fournir au corps humain de l'ARNm, codant pour des protéines thérapeutiques, que le système immunitaire utilise pour combattre le virus. (littérature 1)
L'ARN peut être produit et appliqué beaucoup plus facilement par rapport aux protéines thérapeutiques complètes pour lesquelles il code. Afin de générer de l'ARNm pur à administrer, il a été constaté que la purification par des moyens chromatographiques est très importante. (littérature 2)
La clé de la chromatographie ARN est la configuration du système HPLC. Il est très important que la chromatographie soit effectuée à des températures élevées afin de dénaturer l'ARN lui-même et donc de simplifier sa diversité structurelle et de conduire à une purification réussie. Une température élevée en combinaison avec un gradient binaire entre l'acétonitrile et l'eau comme cela est fait dans la méthode de chromatographie en phase inverse, séparera efficacement et également inactivera et dépliera la RNase. (littérature 3-4)
Le purificateur d'ARN dédié est un système spécialement conçu pour la purification de l'ARN. Il se compose d'une pompe de système à basse pression ternaire, qui vous donne non seulement une formation fiable de gradient binaire entre l'eau, y compris 1,0 M TEAA (pH 7) et l'acétonitrile, mais permet également l'application directe de l'échantillon de grand volume d'échantillon sur la colonne par le pompe du système via son port d'entrée d'échantillon séparé. La plage de débit de cette pompe est comprise entre 10 et 80 ml / min. L'injection d'échantillon via un échantillon ou Variloop est possible avec la vanne d'injection intégrée. Après la soupape d'injection, le solvant ainsi que l'échantillon seront chauffés par un réchauffeur d'éluant puis appliqués sur la colonne, qui en outre est chauffée par un manchon chauffant pour assurer des conditions de purification thermique parfaites. L'identification du produit est réalisée par le détecteur à longueur d'onde unique variable à 260 nm ou à la longueur d'onde de votre choix. Après purification, le fractionnement est effectué par la vanne de fractionnement.
Littérature:
1. Schlake et coll. Thérapie moléculaire, 2019, 27,4
2. Kariko et coll. Recherche sur les acides nucléiques, 2011, 39 (21) e142
3. Gjerde et coll. Purification et analyse d'ARN 2009
4. Ketterer T. et al. Brevet américain 8,383,340 B2.
